實驗室常用是什么規格的層析柱
層析柱是凝膠層析技術中的主體,我們研究所用的就是同興玻璃儀器,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同,從而分離的一種層析法。
層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。
玻璃層析柱,開口大,加料快,不需要其他儀器的配合,上方可以做成標準口與其他的標口玻璃儀器相接,但有不容易測量,篩網下方容易殘留很多液體,層析速度較慢,不準確的特點,一般用于對精度要求沒有那么高的實驗,
加壓層析柱,兩端一般使用4F材料,耐腐蝕,酸堿性的耐度也可以,中段有玻璃材料的,也有有機玻璃材料的,需要與蠕動泵相結合,加快層析速度,用泵將料打進,如果沒有泵則使用比較麻煩。
實驗室常用是什么規格的層析柱
層析柱是凝膠層析技術中的主體,我們研究所用的就是同興玻璃儀器,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同,從而分離的一種層析法。
層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。
玻璃層析柱,開口大,加料快,不需要其他儀器的配合,上方可以做成標準口與其他的標口玻璃儀器相接,但有不容易測量,篩網下方容易殘留很多液體,層析速度較慢,不準確的特點,一般用于對精度要求沒有那么高的實驗,
加壓層析柱,兩端一般使用4F材料,耐腐蝕,酸堿性的耐度也可以,中段有玻璃材料的,也有有機玻璃材料的,需要與蠕動泵相結合,加快層析速度,用泵將料打進,如果沒有泵則使用比較麻煩。
層析柱的操作方法
以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例:
1.吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿整個柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計量溶劑泵按一(5:95)比例泵入溶劑,至溶劑流出止。
2.上樣
將冬凌草的乙醇提取物400G用適量溶解,泵入中壓柱柱頭,然后泵入1000RID。
3.洗脫
以一定比例的一為洗脫液,60ML/MIN的流速進行梯度洗脫,柱的使用壓力為2~ 3KG/C 。按每份500ML收集,TLC檢識展開劑一(2:8),顯色劑5%香草醛乙醇液
至洗脫完全,相同流份合并,回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加入適量熱溶后自然放置,析出結晶,為冬凌草甲素。
4.層析柱再生、平衡
有效成分經TLC檢識全部流出后,用純5000ML再生,一(5:95)平衡后,可再次上樣,反復使用(使用次數隨原料不同而異,一般可連續使用2—6個月以上)。
5.重結晶
冬凌草甲素結晶析出完全后,減壓過濾,然后用少量洗滌(洗滌液保留,作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量熱溶后放置,結晶再次析出,待結晶完全后,抽濾,用少量洗滌,將結晶室溫下晾干后置真空干燥箱中,35度真空干燥至恒重。密封于瓶中,置干燥器中保存。
6.薄層層析分析
取適量冬凌草甲素對照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品溶解后點于同一硅膠G薄層板上,以一(8:2)為展開劑進行展開,5% 香草醛乙醇液顯色,于105。C烘至斑點清晰。表明在該展開系統下,冬凌草甲素樣品和對照品都具有相同的RF值,并呈現出同樣的藍綠點,在制備的冬凌草甲素樣品中,沒有雜質斑痕。